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流式细胞凋亡



流式细胞术(Flow Cytometry, FCM

是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,与传统的荧光镜检查相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术。

 

基本原理

将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室,不含细胞的磷

酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出,鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度,这样,鞘液就能够包绕着样品高速流动,组成一个圆形的流束,待测细胞在鞘液的包被下单行排列,依次通过检测区域。

流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在激光束的照射下,产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,经光电倍增管接收后可转换为电信号,再通过模/数转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理,将分析结果显示在计算机屏幕上,也可以打印出来,还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达,其X轴为测量强度,Y轴为细胞数目。一般来说,流式细胞仪坐标轴的分辨率有5121024通道数,这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据,既可以单独显示每个参数的直方图,也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷,当液滴流经带有几千伏特的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不予充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离。

1、  多色染色

    多色流式,就是通过不同的荧光素,对同一个细胞进行多参数分析。

2、细胞凋亡以及周期

    又称为程序性细胞死亡 (Programmed Cell Death) 是机体主动的、高度有序地清除无用细胞的过程。和细胞坏死 (Necrosis) 相区别,坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程

不同时期凋亡的检测指标的选择

早期:Annexin V

早中期:Cytochrome C 和线粒体相关

中晚期:Caspase-3, 8, 9, other proteins

晚期:DNA Fragment

Annexin V

Caspase3

 

DNA Tunel

     1.样本类型:活细胞

     2.样本量:100ul1*106个细胞)/TEST

        3.仪器型号为C6

    4.样本运输条件:暂定实验服务地区上海,实验内容暂定细胞表面实验,由于细胞活性问题,当天完成实验

 

特点

1、  测量速度快, 分析样本量大;

2、  可检测的样本种类多样

3、  可同时分析单个细胞的多种特征

4、  检测速度快,

 

5、  既是细胞分析技术,又是精确的分选技术。

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实验信息(以下信息,请正确填写,以保证实验的正常进行)
  • 1、样本种属 : 小鼠 大鼠 其他 *
  • 2、寄送样本状态:

    原代细胞, 培养细胞, 血液, 组织, 其他,

  • 3、分析方案: *
  • 4、染色类型 :
  • 5、每个样本Panel数量及详情 (注:每个panel≤4色,可接受染料:FITC,PE,PI,PerCP,PerCP-Cy5.5, PE-Cy7,APC):

    Panel: +

  • 6、数据分析要求 :

    无特殊要求(调补偿后,单阳呈现)
    要求如下(此处默认填写“无”,如果填写“无”之外的要求需额外收费):

  • 7、是否曾经做过预实验:

  • 8、是否要求做预实验:

  • 9、送样方式
    注:
    1,优宁维免费配送一次(客户也可自行邮寄,但须自理邮费);
    2,务必将样品处理成细胞悬液,并使用碎冰运输;
    3,推荐使用闪送,约50-100元;
    4,请在样品准备结束后,4小时内,工作日下午4点前,送至优宁维实验;
    5,联系人及联系方式:刘美13764270135或者4008-168-068转3。

  • 10、提供抗体信息:

    抗体品牌 货号 数量 推荐工作浓度 备注
    +

  • 11、样本情况:(如样品数量较多,此处可只填写样本概况,详情可以邮件发送电子版至labex@univ-bio.com)

    点击这里上传文件 【注 :目前支持*.xls,*.xlsx,*.docx,*.doc,*.pdf上传】

    样本分组 样本编号 样本数量 备注
    +

  • 12、其他要求

    *

  • 13、是否需要加急:
    小于等于5000元订单收取30%加急费用;超过5000元订单收取20%加急费。5个工作日内出结果。(特殊订单除外,一切解释权归优宁维公司所有)
  • 14、是否为实验室打包服务: 是 试剂金额:
  • 提示:
    一、请核对信息后提交,优宁维工作人员会在提交后24小时内联系您。
    二、免疫组化实验样本冰袋运输,除此之外蛋白检测实验一律在干冰条件下运输。
    三、科研实验不可预知性告知:科学实验研究具有实验结果不可预知性,实验项目可能出现与客户预期不吻合的实验结果,甲方愿意接受实验服务项目中存在的结果不可预知风险。
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流式细胞检测常规样品类型 标记颜色 常用流式抗体品牌
培养细胞系 同时检测不超过三色 BD
急性分离原代细胞 Biolegend
分离后培养原代细胞 ebioscience
血液 Beckman

货号:FCM001

规格: 1
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